PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米級(jí)別。

在新冠疫情之前，大多數(shù)PCR實(shí)驗(yàn)室集中在大型三級(jí)甲等醫(yī)院，因其建設(shè)成本高、人員素質(zhì)要求高，實(shí)驗(yàn)室運(yùn)營(yíng)成本高，常規(guī)檢測(cè)樣本量少等特點(diǎn)，很多二級(jí)醫(yī)院并沒有建設(shè)。在政策和疫情發(fā)展的推動(dòng)下，各地二級(jí)及以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)都已經(jīng)建立獨(dú)立合規(guī)的PCR實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室人員經(jīng)過2年多疫情的“錘煉”，也已經(jīng)初步具備了符合崗位要求的素質(zhì)。

新冠疫情終會(huì)結(jié)束，除了新冠核酸檢測(cè)，“遍地開花”的PCR實(shí)驗(yàn)室還能做些什么呢？

一、感染性疾病分子檢驗(yàn)項(xiàng)目

1.乙肝病毒核酸檢測(cè)

利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR以定量檢測(cè)HBV DNA，從而對(duì)HBV感染做出快速早期診斷。用于HBV感染的輔助診斷和乙型肝炎患者藥物治療的療效監(jiān)控。

2.乙肝病毒基因分型檢測(cè)

國(guó)內(nèi)HBV基因型中約60%為C型基因，30%為B型基因。應(yīng)用PCR結(jié)合Taqman技術(shù)，檢測(cè)B/C型HBV特異性DNA核酸片段?？梢越Y(jié)合臨床表現(xiàn)和其它實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)對(duì)患者病情進(jìn)行評(píng)價(jià)。

3.丙肝病毒核酸檢測(cè)

利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)技術(shù)，通過熒光信號(hào)的變化實(shí)現(xiàn) HCV RNA 的定量檢測(cè)。用于HCV感染的輔助診斷和丙型肝炎患者藥物治療的療效監(jiān)控。

4.丙肝病毒基因分型

應(yīng)用PCR結(jié)合Taqman技術(shù)，對(duì)1b型、2a型HCV的特異性RNA核酸片段進(jìn)行檢測(cè)?？梢詫?duì)標(biāo)本進(jìn)行HCV的基因分型，結(jié)合臨床表現(xiàn)和其它實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)對(duì)患者病情進(jìn)行評(píng)價(jià)。

5.結(jié)核分枝桿菌DNA定量檢測(cè)

應(yīng)用PCR結(jié)合Taqman技術(shù)，對(duì)TB的特異性DNA核酸片段進(jìn)行熒光檢測(cè)，從而對(duì)TB感染做出快速早期診斷。用于TB感染的輔助診斷和藥物治療的療效監(jiān)控。

6.EB病毒DNA定量檢測(cè)

應(yīng)用PCR結(jié)合Taqman技術(shù)，采用EBV特異性引物探針，對(duì)EBV DNA進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)。用于EBV感染的輔助診斷和其它感染患者藥物治療的療效監(jiān)控。

7.巨細(xì)胞病毒DNA定量檢測(cè)

應(yīng)用PCR結(jié)合Taqman技術(shù)，對(duì)CMV特異性DNA核酸片段進(jìn)行熒光檢測(cè)，從而對(duì)CMV感染做出快速早期診斷。用于CMV感染的輔助診斷和藥物治療的療效監(jiān)控。

8.單純皰疹病毒DNA定量檢測(cè)

應(yīng)用PCR結(jié)合Taqman技術(shù)，采用HSV特異性引物探針，分別對(duì)HSV 1型和2型的特異性DNA核酸片段進(jìn)行熒光PCR分型檢測(cè)，從而對(duì)HSV感染做出快速早期診斷。用于HSV感染的輔助診斷和藥物治療的療效監(jiān)控。

9.肺炎支/衣原體DNA定量檢測(cè)

應(yīng)用PCR結(jié)合Taqman技術(shù)，對(duì)MP和CP的特異性DNA核酸片段同時(shí)進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)，從而對(duì)MP、CP感染做出快速早期診斷。用于MP、CP感染的輔助診斷和藥物治療的療效監(jiān)控。

10.淋球菌核酸檢測(cè)

淋球菌核酸檢測(cè)分為核酸提取和恒溫?cái)U(kuò)增。適用于定性檢測(cè)男性尿道拭子標(biāo)本、女性宮頸拭子標(biāo)本中的淋球菌RNA。檢測(cè)結(jié)果可用于淋球菌感染的輔助診斷，為性病的早期診斷以及性病高危人群的初篩提供分子診斷依據(jù)。

11.沙眼衣原體核酸檢測(cè)

沙眼衣原體核酸檢測(cè)分為核酸提取和恒溫?cái)U(kuò)增。檢測(cè)結(jié)果可用于沙眼衣原體感染的輔助診斷，為患者的早期診斷以及性病高危人群的初篩提供分子診斷依據(jù)。

12.解脲脲原體核酸檢測(cè)

解脲脲原體核酸檢測(cè)分為核酸提取和恒溫?cái)U(kuò)增。適用于定性檢測(cè)男性尿道拭子標(biāo)本、女性宮頸拭子標(biāo)本中的解脲脲原體RNA。檢測(cè)結(jié)果可用于解脲脲原體感染的輔助診斷，為性病的早期診斷以及性病高危人群的初篩提供分子診斷依據(jù)。

13.人乳頭瘤病毒核酸檢測(cè)

采用PCR結(jié)合熒光探針的體外擴(kuò)增和檢測(cè)技術(shù)，對(duì)不同型別人乳頭瘤病毒基因型進(jìn)行分型檢測(cè)。可以快速準(zhǔn)確診斷臨床尖銳濕疣體表面脫落細(xì)胞，婦女宮頸細(xì)胞及宮頸黏液標(biāo)本中的HPV DNA。可作為臨床可疑尖銳濕疣確診，宮頸癌病因確定，早期確診，治療效果監(jiān)測(cè)的診斷依據(jù)。

14.人類免疫缺陷病毒核酸定性檢測(cè)

采用一步法RT-PCR體系結(jié)合熒光探針的體外擴(kuò)增和檢測(cè)技術(shù)。診斷＜18個(gè)月齡嬰兒早期感染；診斷急性HIV-1感染。確定艾滋病病毒感染。

15.人類免疫缺陷病毒核酸定量檢測(cè)

應(yīng)用RT-PCR技術(shù)結(jié)合熒光探針檢測(cè)技術(shù)?？捎糜跈z測(cè)抗病毒藥物治療效果；監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展；診斷急性HIV-1感染；確定HIV-1感染。

16.B族鏈球菌核酸檢測(cè)

利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)結(jié)合Taqman探針檢測(cè)標(biāo)本中的GBS DNA，從而對(duì)GBS感染做出快速早期診斷。

GBS為兼性厭氧的革蘭陽(yáng)性鏈球菌，正常婦女帶菌率達(dá)30%左右，屬于條件致病菌，孕婦可感染并通過產(chǎn)道傳播給新生兒，是目前引發(fā)新生兒感染*主要的致病菌之一。

二、遺傳性疾病分子檢驗(yàn)項(xiàng)目

1.Y染色體微缺失檢測(cè)

本項(xiàng)目常規(guī)檢測(cè)的適應(yīng)證包括：男性不育癥患者選擇單精子卵泡漿內(nèi)注射或體外受精生育子代前、非梗阻性無精子癥患者、嚴(yán)重少精子癥患者、男性不育癥患者手術(shù)前、原因不明的男性不育癥患者用藥前、無精子癥患者進(jìn)行睪丸活檢前。

推薦檢測(cè)的適應(yīng)證包括：少精子癥患者、精子密度正常但原因不明的男性不育癥患者、男性不育伴隱睪和（或）精索靜脈曲張的患者、不明原因習(xí)慣性流產(chǎn)患者。

2.苯丙氨酸羥化酶基因突變檢測(cè)

采用PCR擴(kuò)增和基因測(cè)序方法檢測(cè)PAH基因突變。對(duì)PAH基因突變進(jìn)行分析診斷，通過對(duì)先證者及其家系的研究，確定致病基因的突變或與致病基因連鎖的多態(tài)標(biāo)記，從而進(jìn)行直接或間接的診斷，確認(rèn)突變，查出攜帶者?？梢栽赑KU癥狀出現(xiàn)前確診患者，及時(shí)采取治療措施。

3.遺傳性耳聾基因檢測(cè)

采用探針特異性PCR技術(shù)，檢測(cè)人外周血中耳聾相關(guān)基因等位點(diǎn)的基因突變，用于臨床非綜合征耳聾（聽力損失）人群的病因輔助診斷以及非聽力損失人群耳聾基因攜帶者的檢測(cè)。

4.遺傳性藥物性耳聾基因檢測(cè)

通過定性檢測(cè)人線粒體基因組中與藥物性耳聾相關(guān)的突變，以輔助臨床診斷及高危人群的篩查和用藥指導(dǎo)，也可用于流行病學(xué)的調(diào)查及產(chǎn)前篩查、新生兒產(chǎn)篩領(lǐng)域。

5.地中海貧血基因檢測(cè)

采用人外周血標(biāo)本檢測(cè)中國(guó)人常見的3種缺失型α-地中海貧血、2種突變型α-地中海貧血和11種突變型β-地中海貧血?？梢詫?duì)高發(fā)區(qū)中攜帶地中海貧血基因人群進(jìn)行輔助診斷，對(duì)婚前、孕期或產(chǎn)前夫婦雙方進(jìn)行檢查，以防止重癥地中海貧血患兒的出生，提高人口素質(zhì)。

三、二代測(cè)序檢驗(yàn)項(xiàng)目

1.BRCA基因突變檢測(cè)

BRCA是重要的抑癌基因，包括BRCA1和BRCA2。BRCA1/2基因是評(píng)估乳腺癌、卵巢癌和其他相關(guān)癌癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的重要生物標(biāo)志物，也是影響患者個(gè)體化治療方案選擇的生物標(biāo)志物。

對(duì)相關(guān)腫瘤患者血液和（或）腫瘤組織進(jìn)行BRCA突變檢測(cè)將有助于更好地判斷預(yù)后、選擇靶向藥物、選擇化療方案、在適當(dāng)?shù)臈l件下對(duì)家族遺傳史患者親屬的患病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，幫助醫(yī)師根據(jù)患者的基因狀態(tài)來選取更精準(zhǔn)的治療方案。

2.肺癌個(gè)性化基因檢測(cè)

對(duì)于希望接受靶向治療或了解耐藥機(jī)制的晚期肺癌患者可采用針對(duì)性的肺癌NGS檢測(cè)，覆蓋多個(gè)肺癌靶向治療相關(guān)基因，對(duì)于肺癌的精準(zhǔn)和分層診斷、靶向藥物的選擇等都具有重要臨床指導(dǎo)意義。

3.乳腺癌基因突變檢測(cè)

對(duì)乳腺癌患者血液和（或）腫瘤組織進(jìn)行基因突變檢測(cè)將有助于更好地判斷預(yù)后、選擇靶向藥物、選擇化療方案、在適當(dāng)?shù)臈l件下對(duì)家族遺傳史患者親屬的患病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，幫助醫(yī)師根據(jù)患者的基因狀態(tài)來選取更精準(zhǔn)的治療方案。

4.BRAF-V600E基因突變檢測(cè)

B-RAF突變的預(yù)測(cè)作用已明確，BRAF-V600E基因突變可導(dǎo)致部分KRAS基因野生型患者對(duì)EGFR-TK1及內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體單克隆抗體藥物治療不敏感，因此檢測(cè)腫瘤患者B-RAF基因突變情況可用于指導(dǎo)靶向藥物的使用。

5.實(shí)體腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)

通過雜交捕獲法對(duì)腫瘤基因序列進(jìn)行富集，然后通過測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行高通量測(cè)序。通過檢測(cè)腫瘤相關(guān)的基因熱點(diǎn)區(qū)域信息，分析這些基因的突變特征，根據(jù)患者的個(gè)體差異化，結(jié)合藥物基因組學(xué)相關(guān)信息，輔助臨床醫(yī)生為癌癥患者選擇合適的治療藥物，制定完善的個(gè)體化治療方案。

四、藥物敏感性相關(guān)分子檢驗(yàn)項(xiàng)目

1.結(jié)核分枝桿菌耐藥基因多態(tài)性檢測(cè)

利用實(shí)時(shí)定量PCR儀的不對(duì)稱PCR擴(kuò)增技術(shù)，檢測(cè)對(duì)利福平和異煙肼耐藥的結(jié)核分枝桿菌基因突變。全球范圍內(nèi)結(jié)核分枝桿菌耐藥率不斷上升，對(duì)藥物療效及結(jié)核病流行產(chǎn)生很大影響，檢測(cè)結(jié)合分枝桿菌耐藥基因多態(tài)性對(duì)結(jié)核病的治療有重要意義。

2.萬古霉素耐藥基因檢測(cè)

采用實(shí)時(shí)PCR技術(shù)對(duì)耐萬古霉素腸球菌進(jìn)行核酸擴(kuò)增和靶序列檢測(cè)。指導(dǎo)臨床調(diào)整抗生素治療方案；快速篩查，以便于早期發(fā)現(xiàn)醫(yī)院內(nèi)感染性病原體感染者和攜帶者，及時(shí)采取相應(yīng)干預(yù)措施，避免醫(yī)院感染的傳播和暴發(fā)。

3.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥基因檢測(cè)

采用實(shí)時(shí)PCR技術(shù)對(duì)MRSA進(jìn)行核酸擴(kuò)增和靶序列檢測(cè)。用于指導(dǎo)臨床調(diào)整抗生素治療方案；早期發(fā)現(xiàn)醫(yī)院內(nèi)感染性病原體感染者和攜帶者，及時(shí)采取相應(yīng)干預(yù)措施，避免醫(yī)院感染的傳播和暴發(fā)。

需要明確的是，實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目的開展與實(shí)際的臨床需求緊密相關(guān)。未來大量中基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)的PCR實(shí)驗(yàn)室如何利用起來，是實(shí)驗(yàn)室管理者需要考量的問題。